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過碘酸希夫反應
來源:互聯網

過碘酸希夫反應(英文名:periodic acid Schiff reaction),簡稱PAS或PAS反應,又稱糖原染色,是顯示糖原的細胞化學方法,該反應適用于細胞和組織中的多糖、黏多糖、黏蛋白等的顯示。

碘酸希夫反應的化學原理為:糖原中的1,2-乙二醇基經過碘酸氧化而產生雙醛基。醛與希夫染料中的無色品紅作用,使無色的亞硫酸品紅失去亞硫酸,重新排列,恢復品紅對結構,顯示紫紅色,定位于胞質中糖原所在部位。

在臨床方面,過碘酸希夫反應可用于鑒別紅血病、紅白血病及貧血類型,急性白血病細胞類型及其他細胞類型。此外,過碘酸希夫反應還可應用于糖尿病的診斷及研究和某些腫瘤的診斷及鑒別等方面。

化學原理

高碘酸希夫反應(periodic acid Schiff reaction,PAS)是顯示多糖、黏多糖、糖蛋白的組織化學反應,糖被強氧化劑過碘酸氧化后,形成多醛,后者再與無色的品紅硫醛配位化合物(即希夫試劑)反應,形成的終產物為紫紅色沉淀。

高碘酸希夫反應又稱糖原染色。糖原中的1,2-乙二醇基經過碘酸氧化而產生雙醛基。醛與希夫染料中的無色品紅作用,使無色的亞硫酸品紅失去亞硫酸,重新排列,恢復品紅對醌結構,顯示紫紅色,定位于胞質中糖原所在部位。

實驗過程

準備材料

實驗器材有骨髓涂片或外周血涂片、染色缸、水浴箱、顯微鏡等;實驗試劑有10g/L高碘酸溶液、希夫(Schiff)染液、偏二亞硫酸溶液(新鮮配制)、20g/L甲綠溶液。

實驗方法

1、取新鮮干燥的骨髓涂片或外周血涂片,用95%乙醇固定10min,待干。

2、滴加10g/L高碘酸溶液,覆蓋整個涂片15~20min,蒸餾水沖洗,待干。

3、涂片置希夫染液中37℃(或室溫)放置20min。

4、用亞硫酸溶液沖洗3次(此步亦可省略),再用流水沖洗2~3min,待干。

5、20g/L甲綠溶液復染10~20min。

6、水洗,待干,鏡檢。

7、結果判斷:細胞胞質中出現紅色彌散狀、顆粒狀或塊狀物質為陽性(細胞核藍色)。胞質無紅色或無紅色顆粒為陰性,如下圖所示。

8、根據反應情況的不同,計數100個同一類細胞,計算出陽性率和積分。

判斷標準

中性粒細胞糖原染色結果判斷標準

淋巴細胞糖原染色結果判斷標準

幼紅細胞糖原染色結果判斷標準

巨核細胞糖原染色結果判斷標準

注意事項

參考范圍

現實應用

糖原染色主要應用于:(1)糖尿病的診斷及研究;(2)某些腫瘤的診斷及鑒別,如卵巢無性細胞瘤睪丸精原細胞瘤、骨尤文肉瘤等;(3)糖原貯積癥的診斷及研究;(4)心機病變及其他心血管疾病的診斷及研究;(5)證明與區分細胞內空泡變性等。

臨床意義

紅血病、紅白血病及貧血類型的鑒別

紅血病、紅白血病的幼紅細胞呈強陽性反應,積分明顯增高;缺鐵性貧血(irondeficiencyanemia,IDA)、重型海洋性貧血及骨髓增生異常綜合征(myelodysplasticsyndromeMD)時,PAS積分亦可增高:溶血性貧血(hemolyticanemia,HA)、淋巴瘤的幼紅細胞呈陰性反應或弱陽性反應;再生不良性貧血妊娠合并再生障礙性貧血,AA)、巨幼細胞性貧血(megaloblasticanemia,MA)時幼紅細胞呈陰性反應。PAS染色對于紅細胞系統疾病的診斷和鑒別診斷有一定價值。但惡性增生的紅細胞并不都呈陽性反應,而良性增生的紅細胞也并不都呈陰性反應,因此診斷時應結合其他臨床資料綜合分析。

急性白血病細胞類型的鑒別

PAS染色可用于輔助鑒別急性白血病的細胞類型:①急性淋巴性白血病原始、幼稚淋巴細胞PAS染色呈陰性或陽性反應,陽性反應物多為紅色粗顆粒狀或塊狀,圍繞核周呈環形排列,胞質底色一般無紅色;②急性粒細胞白血病原始粒細胞呈陰性反應或胞質呈淡紅色彌漫分布;③急性單核細胞白血病原始和幼稚單核細胞呈陰性或陽性反應,存在彌漫分布的紅色細顆粒,胞質邊緣及偽足處顆粒較粗大,可見紅色小珠或裙邊樣反應;M4E0異常嗜酸性粒細胞PAS染色可見深粉紅色小珠;④急性髓細胞白血病M。型PAS染色呈陽性反應,表現為細顆粒、中粗顆粒散在分布,有時可見紅色小珠;紅白血病的有核紅細胞PAS染色多呈陽性反應,且陽性率高,成熟紅細胞可呈陽性反應,其他類型急、慢性白血病的有核紅細胞PAS染色多呈陰性反應;巨核細胞白血病原始巨核細胞PAS染色呈顆粒狀陽性,部分細胞可見小珠狀或塊狀,小巨核細胞PAS染色可見彌散狀分布的細小紅色顆粒,邊緣處為粗顆粒及小珠;嗜堿性粒細胞白血病的嗜堿性粒細胞PAS染色呈強陽性反應,呈粗顆粒、珠狀、塊狀,有時可與幼稚淋巴細胞PAS染色的陽性反應類似,應注意鑒別;漿細胞PAS染色呈弱陽性反應,可見淡粉紅色細小顆粒,極少數可見粗顆粒和小珠;Auer小體PAS染色呈陽性反應。

其他類型細胞的鑒別

PAS染色可用于其他類型細胞的鑒別:①戈謝細胞和尼曼-匹克細胞:戈謝細胞PAS染色呈強陽性反應;尼曼-匹克細胞呈陰性或弱陽性反應,空泡中心呈陰性。②非霍奇金淋巴瘤細胞呈陽性反應,可見粗顆粒散在分布;Reed-Sternberg細胞PAS染色則呈弱陽性或陰性反應。③骨髓轉移的腺癌細胞呈強陽性反應,可見紅色顆粒或塊狀,肥大細胞呈強陽性反應,紅色細顆粒彌散分布,部分細胞可見大而粗的紅色顆粒。

參考資料 >

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