病理切片是將受檢查病變器官、組織用切片機制成的供顯微鏡檢查用的薄片。制作方法是經過快速冰凍、各種化學藥品和埋藏法處理，使組織固定硬化，用切片機切成幾微米厚的薄片，黏附在玻片上，再染以各種顏色，可為臨床診斷、治療提供組織學依據(jù)。
概述
病理切片是形態(tài)學檢查的常用方法，在臨床外科病理診斷，尤其是診斷腫瘤性質時常采用病理切片檢查，對疾病的診斷有重要價值。隨著醫(yī)療事業(yè)的發(fā)展，病理切片的結果對腫瘤治療提供重要的理論依據(jù)。因此，病理切片的制作完整性顯得尤為重要。
制作
所需物品
已固定好病料，石蠟，手術刀，手術剪，鑷子，脫水框，染色缸，梯度脫水酒精和透明劑一套，烘箱，切片機，毛筆，玻片，蛋白丙三醇，染色架，酒精燈，三角架，大燒杯，溫度計，火柴，切片刀，熒光筆或鉛筆。
材料準備
固定
采取的病理材料必須立即放入10％甲醛水溶液固定液中。
脫水
組織經固定后，尚含有多量水分，而水與透明劑苯、石蠟根本不相融合。必須先把組織中的水分除去。但脫水劑必須是與水在任何比率下均能混合的液體，脫水劑常兼有硬化組織的作用。最常用的脫水劑為乙醇、丙酮等。
1．酒精沸點78．4℃，為最常用的脫水劑。脫水能力強，并能使組織硬化，能較好地與二甲苯透明劑相混合。最終結果表明，只要脫水環(huán)節(jié)處理好，都會得到好的切片。脫水的程序為70％一80％一95％一100％。各級酒精2—4小時，視材料的大小、厚薄而定。100％酒精有硬化組織的作用，時間不宜太長，一般不超過3小時。腦組織、脂肪組織或疏松結締組織，脫水時間要適當延長。
2．丙沸點為56℃。脫水作用比乙醇強，但對組織塊的收縮較大，主要用于快速脫水或固定兼脫水。脫水時間l一3小時左右。
透明
透明對組織有脫酒精及透明兩種作用。當組織中全部為透明劑占有時，光線可以透過，組織可呈現(xiàn)不同程度的透明狀態(tài)，此種現(xiàn)象稱為透明，具有這種作用的試劑稱為透明劑。常用的透明劑有：
1．二甲苯是最常用的良好透明劑，不影響各種染色。二甲苯易溶于酒精，能溶解石蠟，也是封固劑，不吸收水，透明能力強，易使組織收縮、變脆，故組織塊在二甲苯中不宜久留，特別對小動物組織材料必須嚴格控制好(各種器官的透明差異很大)，通常為半小時到1小時左右。
當二甲苯透明時必須持組織放在專用二甲苯皿器中，這樣可減少透明時間，有利于組織透明徹底，在換組織塊透明時候，所用的鑷子等器具必須干燥，不得將水滴混入二甲苯中，因水滴易被組織吸收而影響透明程度，潮濕天氣更應引起注意。
2．鄰羥基苯甲酸甲酯（水楊酸甲）為無色油樣液體，易溶于醇、醚及乙酸，難溶于水。透明速度較慢，數(shù)小時或數(shù)天。一般經乙醇脫水后再入冬梓油。
浸蠟（透蠟）
組織經脫水透明后要用石蠟等支持劑透入內部，并除去組織中的透明劑，把軟組織變?yōu)檫m當硬度的蠟塊，以便切成切片。
浸蠟的要點有二：①石蠟要完全滲入細胞的每個部分：②石蠟要緊密而均勻的貼在細胞內外兩面，使組織與石蠟成為不可分離的狀態(tài)。
為了減少組織的收縮和提高浸蠟的效果，浸蠟用的石蠟依據(jù)熔點不同，先經低熔點石蠟再經高熔點石蠟。一般設置熔點50—52℃為第一缸蠟，52—54℃為第二缸蠟；54—56℃為第三缸蠟，第三缸石蠟的熔點根據(jù)季節(jié)可進行調節(jié)，夏天使用熔點56—58℃或58—60℃石蠟，盛夏使用熔點60—62℃石蠟。
浸蠟的時間根據(jù)不同組織類型及其大小而定：組織1—2cm大小，浸蠟2—3小時，2—3cm浸蠟3—5小時，對細胞密集，纖維成分少，如肝、腎應減少時間，含脂肪和纖維成分較多的組織需增加時間。
浸蠟時石蠟在溫箱內的溫度應與石蠟的熔點相配合，溫度不可過高過低，過高會使組織高度收縮變脆，無法切片，過低石蠟將凝固達不到浸蠟的作用。常規(guī)的作法是調節(jié)至略高于石蠟熔點2—3℃?？刂茰囟仁墙灅O其重要的關鍵。
包埋
將液態(tài)的石蠟倒入金屬包埋框或包埋的紙盒中，再將浸好蠟的組織塊平放底部，注意切面方向朝下放置，待石蠟凝固后去掉包埋框，完全冷卻變硬后再修整蠟塊，要求組織外圍的石蠟保留適中以便切片。
切片前的準備工作
1．修整蠟塊，石蠟切片是以石蠟作為組織的支持媒介。應先將包埋的每塊組織周圍過多的石蠟切去，四周留約2mm的石蠟邊。留得過少，使連續(xù)切片分片困難且易破壞組織；留得過多，徒占地方，同時使標本之間的距離過遠而鏡檢不便。蠟塊兩邊必須切成平行的直線，否則切下的蠟條彎曲，也不可修成圓角，致蠟帶容易分開不能成條。
2．玻片處理一般玻片用76X26mm載片，厚度l一1．5mm，厚于1．5mm的玻片不宜用于高倍鏡及油鏡的觀察，選購玻片應注意：從側面看白色的為優(yōu)品，帶藍或綠色的為劣品，平面光滑不帶波紋者為上品，稍有波紋者為次品，邊緣光滑己加工磨邊者為上品，邊緣粗糙未經磨邊者為次品。載玻片上面如有云霧斑點，系受霉菌侵蝕不能使用。
新的玻片也必須擦洗干凈，否則染色時引起切片脫落，方法有①煮沸洗滌法、②洗液浸泡法。最后經95％乙醇浸泡脫脂、烘干。
將洗凈的載玻片上均勻涂抹薄薄的一層蛋白丙三醇(防止組織脫片)，放置冰箱備用。
切片制作過程
1．將預冷的蠟塊固定在石蠟切片機上，使蠟塊的切面與刀口成平行方向，刀的傾斜度通常為15℃，轉動輪轉推進器，調節(jié)切片厚度為6μm，切成厚度均勻的切片。
2．左手持毛筆，右手旋動切片機轉把，切片帶出來之后，用毛筆輕輕托起，再用眼科鑷輕鑷蠟片，以正面放入展片箱中，其水溫40—43℃左右。待攤平整后撈片。
3．貼附切片左手持載玻片之一端，垂直入水去附貼切片，右手用毛筆輔助推動，附貼至玻片上的三分之二處。
4．切片貼附后，放在空氣中稍晾干，即可進行烤片。血塊組織、皮膚組織須及時烤片。但對腦組織、脂肪組織待完全晾干后才能進行，這樣可防止產生氣泡而影響染色?？酒臏囟纫韵炄芙鉃闇?。也可以放置60℃烘箱內烘焙過夜。
實驗注意事項
1．固定組織所用的固定液要充足，至少相當于標本總體積的5倍以上，標本容器及其口徑有適當大小，使標本能原形進行固定，避免使標本遭受擠壓。
2．組織塊透明在制片中是很重要的環(huán)節(jié)，如果組織不能透明，其原因可能有脫水未盡、組織太厚、透明時間不夠以及與某些組織本身性質有關等。所以應從多方面考慮，盡可能使組織達到透明目的。通常根據(jù)透明時間與眼觀相結合判斷透明程度。
3．凡是陳舊、腐敗或干枯的組織不易制成好切片。
4．固定失時或固定不當?shù)慕M織，染色時常出現(xiàn)核染色質著色淺、輪廓不清，出現(xiàn)程度不等的片狀發(fā)白區(qū)。
5．組織脫水、透明和浸蠟過度，會造成組織過硬過脆，特別是小動物組織應嚴格控制。
6．切片刀不鋒利，切片時會自行卷起或皺起，不能順利連成長蠟帶。切片刀有缺口，易造成切片斷裂、破碎、不完整及刀痕等現(xiàn)象，不利于切片和觀察。
7．組織切片機各個零件和螺絲應旋緊，切片刀應固定牢固，否則將會產生震動，以致出現(xiàn)切片厚薄不勻和橫皺紋等現(xiàn)象。
整個制作環(huán)節(jié)參考資料為：
病理切片機
病理切片機是重要醫(yī)療精密儀器之一。主要用于病理、科研、教學及其他生物切片用。切片機由刀座、刀片、標本槽、調節(jié)部件及操作部件等組成?？筛鶕?jù)需要調節(jié)切片厚度，間隔厚度及切片面積。操作時應按規(guī)程，并在所限定范圍內；使用完畢及時清擦，對運動摩擦而保持潤滑；停用時用機罩蓋好，避免灰塵。
病理切片檢查報告
將病理切片，經顯微鏡觀察后所作的記錄。可供檢查病理變化,研究其發(fā)生、發(fā)展。為臨床診斷、治療提供依據(jù)。是患者病歷的組成部分。
影響病理切片制作的影響因素
病理切片在臨床醫(yī)療中每天都會進行，其應用廣泛且對診斷疾病有重要價值。病理切片制作需減少對切片的損害，提高疾病的診斷效果。影響病理切片損害的主要因素主要是以下這些原因。
樣本的選取
在樣本切割取樣時可能會破壞組織的完整性或送檢時間間隔長，運輸途中劇烈的振蕩使組織破壞等。
制作病理切片
這一步是最重要的影響因素，大部分的病理切片損害是該過程中被破壞，如包埋切片、標本固定、染色封固中，由于技術人員的不正確操作或失誤影響切片完整性。
其他因素
不同的實驗環(huán)境、操作人員的技術水平以及儀器、器皿、試劑的差異等，均直接或間接的影響病理標本的完整性。
相應的處理方法
針對病理切片常見影響因素的處理方法通過對各影響因素的分析，我們初步制定相應的處理方法。
規(guī)范取樣
手術取樣時注意組織的完整性，用統(tǒng)一的無菌器皿裝取標本，盡快送檢并避免劇烈振蕩。
規(guī)范病理切片的制作過程
包埋切片、標本固定、染色封固等由專業(yè)熟練的技術人員進行，規(guī)范切片制作的標準。
實驗室環(huán)境
每天進行消毒和檢測，將溫度、濕度及空氣設置到指定標準。
實驗室人員進行定期培訓和檢查
對病理檢查的相關知識和技術操作進行統(tǒng)一規(guī)范。
切片制作
使用相同的病理切片室、配套實驗試劑、使用標準的儀器、設備等，實驗前檢查儀器和試劑的完整性、有效性，降低外部因素的影響。
綜上所述，病理切片檢查是常見的形態(tài)學檢測方法，對診斷患者病情有重要意義，為減少影響病理切片的損害，需做到外部因素降低的同時規(guī)范操作流程，保證病理切片的完整性，并提高臨床診斷的效率。
數(shù)字病理切片
數(shù)字病理切片?(digitalslideofpathology)又稱虛擬病理切片(virtualslideofpathology)，是一種現(xiàn)代數(shù)字電路與傳統(tǒng)光學放大裝置有機結合的技術。它將傳統(tǒng)的玻璃病理切片通過全自動顯微鏡或光學放大系統(tǒng)掃描采集得到高分辨數(shù)字圖像，再應用計算機對得到的圖像自動進行高精度多視野無縫隙拼接和處理，獲得優(yōu)質的可視化數(shù)據(jù)以應用于病理學的各個領域。
參考資料 >
病理組織切片制作.湖北中醫(yī)藥大學.2023-09-15
病理切片檢查報告.中國知網(wǎng).2023-09-15
病理切片.中國知網(wǎng).2023-09-15
病理切片機.中國知網(wǎng).2023-09-15