多糖類化合物是野生黑芝所含化學(xué)成分之一，現(xiàn)已證明，靈芝多糖類具有抗腫瘤作用、免疫調(diào)節(jié)作用、降血糖作用、降血脂作用、抗氧化作用和抗衰老作用，故靈芝多糖類是靈芝的主要有效成分。臨床試驗(yàn)也證實(shí)，靈芝多糖可作為腫瘤化學(xué)治療和放射治療的有效輔助治療藥。
分離純化鑒定
靈芝多糖類的分離
靈芝多糖類的分離、純化及結(jié)構(gòu)確證的方法及步驟可概括如下：多采用熱水提取、分部沉淀的方式分離靈芝的多糖組分；進(jìn)一步經(jīng)各種層析如DEAE纖維素柱色譜、Sephadex G75柱色譜，凝膠過濾如Sepharose CL—4B凝膠過濾，高壓電泳和聚丙胺凝膠電泳等處理可獲純化的多糖；后者經(jīng)酸水解、紙色譜、氣相色譜分析可確定其單糖組分，經(jīng)酶水解可檢測殊碳糖（anomeric）結(jié)構(gòu)；經(jīng)甲基化技術(shù)及Smith降解、氣相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用、紫外及紅外光譜分析、核磁共振等可確定多糖的連接方式和基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。
平均分子量
多糖的分子量可通過凝膠柱色譜如SephadeaxG—100柱色譜、超離心測沉降系數(shù)等方法測定，一般在測得分子量范圍后，求出平均分子量。
理化特性
生物活性有差異
由于野生黑芝的種類、產(chǎn)地、分離提取方法各異，所獲靈芝多糖的物理化學(xué)特性、分子量、單糖組分和連接方式不同，生物活性亦有差異。如Hiroshi等（1985）報(bào)道，赤靈芝子實(shí)體熱水提取物經(jīng)濃縮、透析及系列色譜后獲得兩種多糖ganoderan A和B。ganoderan A的分子量9 300，旋光度[α]D+58.8°，ganoderan B分子量3 600，旋光度[α]+33.3°，二者對小鼠均具降血糖作用。
兩個降血糖有效成分
隨后，他們又從赤芝子實(shí)體中分離出兩個降血糖有效成分ganoderan B和C，均為糖肽，分子量分別為7 400和5 800。物理化學(xué)和化學(xué)研究證明，ganoderan B含吡喃葡萄糖酰基β-1→3主鏈和β-1→6側(cè)鏈，ganoderan C則含D-吡喃葡萄糖酰基β-1→3和β-1→6連接和D-吡喃半乳糖酰基α-1→6連接。Mizuno等（1986）報(bào)告，赤芝子實(shí)體經(jīng)85%乙醇（80℃），熱水（100℃），3%草酸銨（100℃）和5%氫氧化鈉（30℃）提取后，殘?jiān)儆?%氫氧化鈉（含0.1%硼氫化鈉，80℃），20%氫氧化鈉（含0.1%硼氫化鈉，30℃）和5%氯化鋰（溶于二甲醋酸中，70℃）提取，獲多糖組分A、B、C。
A和B經(jīng)乙醇分離
醋酸沉淀，Sepharose CL-4B凝膠過濾，得4個β-葡聚糖，其中I和II來自A，III和IV來自B。從C分離出脫乙酰甲殼質(zhì)（chitosan）（V）。I—V經(jīng)80%甲酸（85℃）處理可獲相應(yīng)的甲酰化多糖和低分子量多糖。I—IV主要由葡萄糖和少量的糖醛酸、木糖、甘露糖組成，并具β-（1→3）-D-葡聚糖主鏈和β-（1→6）葡萄糖基側(cè)鏈，其分子量分別為330 000、60 000、160 000和110 000。不同之處是IV不含木糖，但含1.2%蛋白質(zhì)。V經(jīng)酸水解后，主要含氨基葡萄糖，并含少量葡萄糖，經(jīng)紅外光譜和X射線分析證明為脫乙酰甲殼質(zhì)。給小鼠腹腔注射II、III以及III的甲酸和I～I(xiàn)V的低分子量多糖均具有宿主中介性的抗腫瘤活性，半數(shù)抑瘤量（ID50）分別為42.5mg/kg、34.1mg/kg、70.2mg/kg、22.4mg/kg、17.0mg/kg、32.1mg/kg和25.8mg/kg。Mizuno等（1985）報(bào)告，赤靈芝子實(shí)體經(jīng)水提取后，其殘?jiān)?jīng)3%草酸銨溶液（100℃）和5%氫氧化鈉（30℃）提取后，得2個水不溶多糖A和B。A經(jīng)真空濃縮、透析、凍干，Shepharose CL-48凝膠過濾，獲主要組分C。B用醋酸中和至pH5～6，得酸性異多糖D，加乙醇沉淀得糖蛋白E和另一種異多糖。C由酸性β-D-葡聚糖構(gòu)成，含葡萄糖77%、葡萄糖醛酸10.3%以及少量的果糖、木糖、甘露糖和半乳糖，分子量10 000～30 000。D的分離程序同A，它含兩個主要成分G和H，G和H均為酸性異多糖，分別含葡萄糖92%和95%，葡糖醛酸9.7%和13.0%以及少量果糖、木糖、甘露糖、乳糖，分子量70 000～100 000。給小鼠腹腔注射A—H對S180均具有抗腫瘤活性，50%抑瘤量為（6.3～26.3)mg/kg，但口服無效。
赤靈芝子實(shí)體經(jīng)熱水提取
1989～1994李榮芷、何云慶等先后報(bào)告，赤芝子實(shí)體經(jīng)熱水提取，乙醇分部沉淀、透析、除蛋白等步驟得靈芝多糖BN3A、BN3B、BN3C和GL-A、GL-B、GL-C。進(jìn)一步經(jīng)DEAE纖維素柱色譜分離，酶解，酸水解，高碘酸氧化，甲酸生成，Smith降解、氣相色譜、高壓液相色譜分析和光譜分析等從BN3B、BN3C、GL-A、GL-B和GL-C中共分離鑒定了18個靈芝多糖均一體，其中5個肽多糖、4個葡聚糖，其余為雜多糖，其化學(xué)結(jié)構(gòu)及分子量見表6-4。
化學(xué)結(jié)構(gòu)
均一體
化學(xué)結(jié)構(gòu)
分子量
BN3B
BN3B1
β（1→6）β（1→3）
葡聚糖
3.50×104
BN3B2
β（1→6）β（1→3）
4.00×104
BN3C
BN3C1
β（1→6）β（1→3）
葡聚糖
1.62×104
BN3C2
β（1→6）β（1→3）
肽多糖
2.45×104
GLA2
肽多糖
0.93×104
GLA4
均以β（1→3）為主
雜多糖
1.33×104
GLA6
含少量β（1→6）及β（1→4）
肽多糖
1.28×104
GLA7
雜多糖
1.20×104
GLA8
肽多糖
1.48×104
GLB
GLB2
β（1→4）為主，尚有β（1→6）
0.71×104
GLB3
β（1→4）為主，極少β（1→6）
甘露葡聚糖
0.77×104
GLB4
β（1→4）
0.90×104
GLB6
β（1→4）含乙酰
雜多糖
0.88×104
GLB7
β（1→4）為主，尚有β（1→6）
雜多糖
0.90×104
GLB9
β（1→4）為主
半乳葡聚糖
0.93×104
GLB10
β（1→4）β（1→6）含乙酰基
雜多糖
0.68×104
GLC
GLC1
β（1→4）少量β（1→6）
肽多糖
0.57×104
GLC2
β（1→4）少量β（1→6）含乙酰基
0.60×104
基本化學(xué)結(jié)構(gòu)
Mizuno等（1982）經(jīng)熱水提取，乙醇分部沉淀，并經(jīng)離子交換色譜，pH依賴的Cetavlon處理、凝膠過濾以及Con A-Sepharose GL-4B親和色譜等純化，從人工培養(yǎng)的平蓋靈芝菌絲體中得到一個多糖組分。進(jìn)一步通過甲基化、核磁共振、高碘酸氧化、Smith降解和β-D-葡聚糖酶（β-D-glucanase）分解等技術(shù)研究多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)。α-葡聚糖組分具有α（1→4）葡萄糖主鏈，主鏈上每9～12個殘基連接α（1→6）支鏈，該組分僅有微弱抗腫瘤活性。β-葡聚糖組分具有β（1→3）葡萄糖苷主鏈，主鏈上每12個殘基通過β（1→6）連接一個單糖苷支鏈。其中之一顯示顯著的抗小鼠S180活性，50%抑瘤劑量為0.74mg/kg。
Mizuno和Miyasaki等分別從赤靈芝、平蓋靈芝和紫芝加哥提取出具有抗腫瘤活性的多糖。并確證其基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。
就抗腫瘤活性
靈芝多糖并無種間差異，它們和從其他真菌中所獲多糖一樣，具有以下三個特性：
1.初級結(jié)構(gòu)的分子量在3×10^5以上。
2.多聚物的連接方式均有β-1-3-D-殘基的主鏈和β-1-6-D-葡萄糖側(cè)鏈殘基。但從不同真菌提取的多糖的β-1-6-D-葡萄糖的分支程度不等，靈芝多糖的主鏈殘基與側(cè)鏈殘基的比例為5∶2，即每個主鏈殘基環(huán)繞2個β-1-6-D-葡萄糖殘基。無1-6β側(cè)鏈的1-3-β葡聚糖未見抗腫瘤活性。
3.多糖的三維螺旋結(jié)構(gòu)參與其抗腫瘤活性，此結(jié)構(gòu)遭破壞則影響其活性。
參考資料 >