DPPH,即是1,1-二苯基-2-苦(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)、2.2-二苯基-1-苦肼基、1,1-二苯-2-苦基肼、2,2-二苯基-1-苦基肼,又稱自由基接受體,化學式是C??H??N?O?,分子量為394.32,為是一種可用于定量測定自由基的物質,是一種穩定自由基型阻聚劑。雖然它本身也是自由基,但由于它們很穩定,不能引發單體聚合,只能有效地與鏈自由基結合,使鏈自由基消失。
名稱
1,1-二苯基2-三1-溴-2-硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl )
該品具有刺激性。吸入、口服或皮膚接觸有害。大量使用應穿適當的防護服和戴手套。
DPPH有兩個主要的應用,都用于實驗室研究中:一是在含有自由基的化學反應中作為一種監測反應的物質,典型的用于抗氧化成分的體外抗氧化性評價;還可以作為電子順磁共振信號位置和強度的標準物質。
性質應用
DPPH具有幾個不同結晶形態,它們的晶格對稱性和熔點(m.p.)存在差異。商品化的粉末是不同晶相的混合物,熔點在130℃附近。DPPH-Ⅰ(m.p. 106℃)是正交晶系,DPPH-Ⅱ(m.p. 137℃)是無定形態,DPPH-Ⅲ(m.p. 128-129℃)是三斜晶系。
DPPH是一種很穩定的氮中心的自由基,它的穩定性主要來自3個苯環的共振穩定作用及空間障礙,使夾在中間的氮上不成對的電子不能發揮其應有的電子成對作用。作為一種穩定的自由基,DPPH可以捕獲(“清除”)其他的自由基。因此通過加入DPPH后觀察某一化學反應的速率是否減慢,來作為這一反應是否具有自由基反應本質的指標。由于DPPH自由基在以300~400之間為中心處具有強烈的吸收,因此在溶液中呈現深紫色,并且在被中和之后會變為無色或淺黃色。利用這一特性可以直觀地檢測反應的過程,通過記錄DPPH在在520nm吸光度值或者EPR信號的變化可以得到初始自由基的量。
由于DPPH是十分有效的自由基捕獲劑,因此它在自由基調控的聚合反應中是一種很強的抑制劑(阻聚劑)。
作為一種穩定和良好定性的固體自由基的來源,DPPH可能是最為廣泛使用的電子順磁共振信號位置(g-marker)和強度的標準物質----通過稱量可以確定新鮮配置的樣品自由基的數目,DPPH的EPR分裂因子校正在g=2.0036。DPPH的信號一般聚合為單一的線,在更寬的功率范圍內,信號強度與微波功率的平方根呈線性關系,因此用DPPH作為校正的標準物質十分方便。DPPH的稀釋特性(每41個原子含一個不成對自旋)導致它具有一個相對小的線寬(1.5–4.7Gauss)。但是若溶劑分子保持在結晶狀態并且在高頻率的EPR設定下測定,線寬可能會增加。
清除測試
原理
DPPH法于1958年被提出,廣泛用于定量測定生物試樣和食品的抗氧化能力。此法是根據DPPH自由基有單電子,在517nm處有一強吸收,其醇溶液呈紫色的特性。當有自由基清除劑存在時,由于與其單電子聯會而使其吸收逐漸消失,其褪色程度與其接受的電子數量成定量關系,因而可用分光光度計進行快速的定量分析。
實驗步驟
1.用乙醇配置 0.1mmol/L 的DPPH溶液,避光保存。配置 0.5mg/mL 的Vc溶液(作為對照)。將測試樣品稀釋至不同濃度。
2.將2mL測試樣品溶液及 2mL DPPH 溶液加入到同一試管中,搖勻,室溫下暗處靜置 30min 后測定其吸光度A sample,同時測定 2mL DPPH溶液與 2mL 溶劑(蒸餾水或者相應的緩沖溶液)混合后的吸光度 A 監察,以及2mL測試樣品溶液與2mL乙醇混合后的吸光度A blank。
3.自由基清除能力的表示:
清除率越大表明抗氧化能力越強。為了更直觀的表明樣品的抗氧化能力,一般選用其他常見的抗氧化劑作為對照,比如Vc。可以通過繪制Vc濃度與清除率之間的工作曲線,用Vc當量濃度表示樣品的清除自由基的能力。
清除測試的缺陷
由于DPPH是脂溶性的,因而與細胞的水性環境不匹配。現已提出了其替代法,即PTIO自由基清除法。該法可以在水溶液(或pH7.4緩沖溶液)中進行,具有較好的生物相關性。
參考資料 >
2.2-二苯基-1-苦肼基.上海紫一試劑廠.2024-03-21
1-二苯基-2-苦基肼.知網空間.2024-03-21
1-二苯基-2-苦肼自由基(DPPH·).知網空間.2024-03-21
阻聚劑.中國大百科全書.2024-03-21