基因導入是指將已知基因轉移到真核生物中，并使其在基因組中穩定表達的技術。這是改變物種遺傳性狀的基本手段之一?；驅胪ǔＯ葘⒛繕思毎寺』?，然后使用顯微操作將特定基因注入受體生物的受精卵原核生物中，隨后將受精卵植入生殖管道，發育成的個體既能表達注入基因所決定的性狀，也能將該基因傳遞給后代。
應用實例
基因導入的成功案例包括“超級小鼠”的培育。這些小鼠生長迅速，74天時的體重幾乎達到同窩正常小鼠的兩倍。這項成就不僅為遺傳工程和研究遺傳性疾病（如巨人癥）提供了模型，還為促進經濟動物快速生長開辟了新路徑。
實現方法
物理方法
DNA直接注射法
這是一種簡單的基因導入方法，盡管注入量有限，接觸的腫瘤細胞數量也較少，因此腫瘤細胞轉化率較低。通常通過腫瘤局部多點注射給藥來提高轉化率。
顆粒轟擊技術
這種方法涉及將目的基因包裹在金屬顆粒中，然后利用高壓發射裝置加速金屬顆粒進入細胞，從而顯著提高腫瘤細胞的轉化率。
化學方法
脂質體載體
脂質體載體方法具有安全性高、操作簡便、毒性低、無免疫原性等特點，適合于注射方式進行器官特異性轉移，并具有一定的轉移效率。除了病毒載體轉移方法，脂質體載體也是體內基因轉移的有價值選擇。常用于體外轉化細胞，或通過瘤組織內注射進行體內轉化，并已有少量臨床應用報道。常用的脂質體產品為Lipofectin，它可以自發地與脫氧核糖核酸形成配位化合物，保護外源DNA免受核酸酶降解，具有制備簡單、安全無毒、無免疫原性、重復性、對基因片段大小無限制且轉染操作方便等優點。由于可以直接與細胞膜融合，能有效避免溶酶體破壞，因此轉染效率較高。然而，脂質體的靶向性有限。Nishikawa等人通過尾靜脈注射含有熒光素酶基因的質粒DNA-脂質體復合物，發現在肺、肝、脾等多個器官組織中有熒光素酶基因及其產物的持續表達，超過三個月。常規脂質體容易被網狀內皮系統（RES）細胞攝取，在巨噬細胞本身就是靶細胞的位置，RES的這種親和力是有益的。Hasegawa等人使用日本血凝病毒（hemagglutinating 病毒 of Japan，HVJ）脂質體作為載體，使用HSV-tk/Gcv系統治療肝癌，發現在體外試驗中，當Gcv濃度為100μg/mL時，幾乎所有腫瘤都被殺死，即使轉導率為20%，也有三分之一的腫瘤被消滅。重復使用效果更好，皮下注射未觀察到明顯炎癥反應。
受體介導法
這種方法利用肝細胞表面豐富的轉移因子和糖蛋白受體，人工合成多聚陽離子氨基酸，然后連接轉移因子（或糖蛋白）和目的基因，形成配位化合物，通過與肝細胞表面受體結合來實現目的基因的轉移。這種方法具有良好的靶向性，但由于受體介導的內吞小泡會被轉運至溶酶體，易被溶酶體降解，導致目的基因表達時間短，表達效率低?？梢酝ㄟ^使用氯喹抑制溶酶體酶或腺病毒科與內吞小泡融合來破壞它們，釋放外源脫氧核糖核酸，從而提高轉化效率。
生物學方法
逆轉錄病毒（retrovirus，Rv)
逆轉錄病毒構建簡單，能夠容納的最大外源基因容量可達8kb，整合到宿主細胞基因組中而不產生病毒蛋白表達。但它只能感染分裂期細胞，體外制備滴度較低，且隨機整合可能導致“插入性突變”。
腺病毒（adenovirus,Adv)
腺病毒是近年來肝細胞肝癌基因治療中最常見的病毒載體之一。體外制備滴度較大，能夠容納的最大外源基因容量可達35kb，不會整合到宿主細胞基因組中，因此避免了插入突變的風險，能夠感染分裂細胞和非分裂細胞。但是，易引發宿主免疫反應，導致轉染效率下降，大劑量靜脈給藥可能會導致嚴重的肝臟炎癥反應，因此全身給藥受到限制。Nagao等人發現瘤內注射重組腺病毒科后，目的基因能夠有效表達，但表達時間短暫，重復注射后表達效率降低，并誘發體液和細胞免疫反應。
單純皰疹病毒
單純皰疹病毒（herpes simplex 病毒，HSV）對非分裂細胞具有天然親和力，能夠容納的最大外源基因容量可達30kb，體外制備滴度接近腺病毒。但在構建過程中難以去除與裂解細胞相關的基因，因此對細胞毒性較大。
腺相關病毒
腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）對人體無致病性，能夠感染非分裂S相細胞，還能將基因轉入非周期（noncyling）腫瘤細胞。AAV是一種缺陷前病毒，可用于攜帶外源性重組基因組，已應用于肝和肝癌細胞的治療基因轉移。
其他病毒
痘苗病毒（vaccinia 病毒）能夠在細胞內部獨立復制和轉錄，并能以強效方式表達多種腫瘤抗原。桿狀病毒（bacul virus）能夠感染肝細胞和肝腫瘤細胞，并能增強肝細胞腫瘤壞死因子α（TNFα）、白介素-1α（IL-1α）、白介素-1β（IL-1β）的表達。
參考資料 >
基因導入的方法.X技術.2024-10-24
第四篇基因導入.道客巴巴.2024-10-24
基因導入的生物學法.分析測試百科網.2024-10-24