細菌先經堿性染料結晶染色，而經碘液媒染后，用乙醇脫色，在一定條件下有的細菌此色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌（G+），后者為革蘭氏陰性菌（G—）。
染色法簡介
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫師Gram創立
為觀察方便，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進行復染。陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽孢的桿菌和絕大多數和球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應；弧菌，螺旋體和大多數致病性的無芽孢桿菌屬都呈現負反應。
原理
革蘭氏染色目前有三種觀點：等電點學說、化學學說和滲透學說。
等電點學說
革蘭氏陽性菌的等電點在PH2-3，比陰性菌（PH4-5）低，加之碘為弱氧化劑，可降低革蘭氏陽性菌的等電點，致使兩類菌的等電點差異擴大，因此陽性菌和堿性染料的結合力比陰性菌更強。
化學學說
碘液在菌體內與甲基紫結合后又和菌體內核糖核酸檸檬酸鎂蛋白質配位化合物結合，此結合物不易被丙酮乙醇脫掉，呈革蘭氏染色陽性。因革蘭氏陰性菌缺乏核糖核酸鎂鹽，故對碘與結晶紫結合物攝取少，且不牢固，易被丙酒精脫色而呈革蘭氏染色陰性。
滲透學說
乙醇使陽性菌所含粘肽多糖脫水而致細胞壁間隙縮小，通透性降低，在菌體內保留了染料-碘復合物，呈紫色。陰性菌含粘肽少，細胞壁變化不大，通透性不受影響，菌體內的染料碘復合物較易透出，失去紫色，被復染成為紅色。
試劑
Crystal violet(甲基紫)、Gram 碘(碘液)、Decolourizer（丙酮乙醇）、Safranin（稀釋沙黃）
操作
1．標本處理：（1）.有菌部位的標本，如痰液、糞便、各種拭子、創面等可直接涂片。
（2）.無菌部位的標本，如腦脊液、胸水、腹水、膽汁、尿液、關節液等，應取適量標本（最高可達5-7ml）,經3000rpm 離心10min.，取沉渣涂片染色。
2．涂片制作：菌液涂片時，用接種環沾取菌液點在載玻片上，標本可直接在玻片上涂布；菌落涂片時，先取生理鹽水一滴，置玻片上，用接種針挑取菌落在鹽水中涂布。制作的涂片應自然干燥，并經火焰固定，固定的溫度不宜過高，以玻片背面接觸手背不燙為準，否則可能使細菌形態改變。將固定后的涂片進行染色。
3． 染色方法：
（1）.加上Crystal violet(甲基紫)后，染色3-5秒或更久，之后用自來水沖洗之。
（2）.加上Gram 碘(碘液)后染色3-5秒或更久，之后用自來水沖洗之。
（3）.以Decolourizer（丙酮乙醇）脫色約5-10秒，并用自來水沖洗之。
（4）.加上Safranin（稀釋沙黃）后，染色3-5秒或更久，之后用自來水沖洗之。
（5）.吸干或在空氣中涼干后，置油鏡鏡檢。
4．結果觀察：紫色為革蘭氏陽性，紅色為革蘭氏陰性。
[報告方式]：革蘭氏染色：檢出革蘭氏陽性球菌；革蘭氏陰性球菌
檢出革蘭氏陽性桿菌；革蘭氏陰性桿菌
[注意事項]：
1．標本涂片不能太厚，嚴格按操作要求進行。
2．玻片通過火焰溫度不能太高。
3．若涂片較厚，應延長脫色時間，直至不在出現紫色為止。
臨床意義
通過革蘭氏染色，將細菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰性，便于臨床治療。
附言
1 沙黃（番紅）Safranine T [C20H19ClN4=350.85]
2 碘液配制：0.01mol/l碘液——稱取1.3g碘，置于50mol燒杯中，加入2.5g碘化鉀及25毫升蒸餾水，不斷攪拌之，使其溶解均勻。再加0.2摩爾濃鹽酸(體積質量1.19g/cm3)，再加蒸餾水稀釋到1000mol。溶液應貯藏在褐色試劑瓶中，儲于低溫暗櫥內。有效期為一個月左右
革蘭氏陰性菌，以[大腸桿菌]為代表。大腸桿菌為兼氣性菌種，一般生存於腸道中及厭氧的還境中。革蘭氏陰性菌細胞壁的特征為有一層out member 與陽性菌種不同。目前對大腸桿菌的研究很多，除了它是一般食物中是否有被污染的指標外，很多分子生物學方面的研究皆需要使用到大腸桿菌當作實驗宿主
參考資料 >