TRIzol試劑是一種含有異硫氰酸胍和酚的單相液，能迅破碎細胞并制細胞釋放出的核酸酶。可從多種生物樣品中分離高質量總核糖核酸或同時分離RNA、脫氧核糖核酸和蛋白。解耦聯劑異硫酸胍是一類強力的蛋白質變性劑，可溶解蛋白質，并使蛋白質二級結構消失，細胞結構降解，核蛋白解離。酚裂解細胞，使細胞中的蛋白質和核酸解聚。酚還變性蛋白質，部分抑制RNA酶活性。
組成與工作原理
Trizol試劑是一種含有水飽和酚，8-羥基喹啉、異硫氰酸胍，β-2-巰基乙醇等成分的混合物。其工作原理是首先通過苯酚、異硫氰酸胍裂解細胞，異硫氰酸胍它既可破壞細胞結構使核酸從核蛋白中解離出來,又對核糖核酸酶有強烈的變性作用，使細胞中的RNA釋放;8-羥基啉、異硫氰酸胍、β-基乙醇等可以抑制RNA酶活性，保護RNA完整性。隨后加入的三氯甲烷則促使細胞裂解液分層,脫氧核糖核酸、蛋白質與苯酚結合后存在于下層的氯仿有機相，而核糖核酸存在與上層的水相，從而實現RNA的分離與提取。上層水相中的RNA，經過2-丙醇與乙醇的多步沉淀與洗滌,去除鹽雜質以及多余的水,得到純化的RNA分子,最后使用瓊脂糖凝膠電泳檢測所提純的總RNA濃度以及完整性用核酸測定儀進行精確定量。
基本特點
制備方法
除了購買成品TRIzol試劑，也可以自己配置TRIzol溶液。在的燒杯中加入25.77%的無RNase超純水，然后依次加入22%的異硫氰酸胍、1.54%的檸檬酸鈉溶液(pH≥7)，2.32%的十二烷基肌氨酸鈉溶液(Sarcosy)，4.40%的醋酸鈉溶液(pH≥4)，混合均勻，最后加入44%的重蒸苯酚，混合均勻。（注意：TRIzol需4℃低溫保存，保質期約一年）。
應用領域
TRIzol?試劑一般應用于實時熒光定量PCR(qPCR)，反轉錄酶PCR(RT-PCR)，cDNA文庫構建，核酸酶保護測定，Northern 印跡，克隆。
TRIzol?試劑可很好地處理少量組織(50–100mg)和細胞(5×106)以及大量組織(≥1g)和細胞(>107)，且包含用于從人、動物、植物或細菌來源的樣品中進行純化的方案。TRIzol?試劑通過在樣品均質化期間高效抑制RNase活性來維持核糖核酸的完整性，同時破壞細胞并溶解細胞組分。TRIzol?試劑方法的簡單性使其可同時處理大量樣品。整個程序可在1小時內完成。通過TRIzol?試劑分離的總RNA不含蛋白和脫氧核糖核酸污染。
TRIzol?試劑可以連續沉淀單份樣品中的RNA、DNA和蛋白。使用TRIzol?試劑均質化樣品后，加入三氯甲烷，使勻漿分離成透明的上層水層（含RNA）、中間相和紅色下層有機層（含DNA和蛋白）。使用2-丙醇從水層中沉淀出核糖核酸。使用乙醇從中間相/有機層中沉淀出DNA。通過異丙醇沉淀從苯酚乙醇上清液中沉淀出蛋白。洗滌沉淀出的核糖核酸、DNA或蛋白以去除雜質，然后復溶以用于下游應用。
注意事項
危害健康
TRIzol對人體有害，使用時應戴一次性手套，注意防止濺出。如果接觸到TRIzol試劑，需要立即使用大量去垢劑和水沖洗。該試劑還含有酚類和疏基乙醇等成分，具有特殊氣味，請于吸取試劑溶液后馬上蓋好瓶蓋，或于通風櫥中操作。
儲存事宜
請將TRIzol試劑儲存于2~8℃，有效期為3年。注意：不同生產廠家生產的TRIzol試劑會有不同要求，具體儲存方法可以參考使用說明。
相關歷史
研發歷史
TRIzol?試劑是以ChomczyńSKI與Sacchi在1987年提出的一步分離核糖核酸法為基礎發明的。Chomczy日本精工將此方法申請了專利。（專利號4,843,155/5,346,994）
相關公司
TRIzol為由生命科技（Life Technologies）持有的商標，由生命科技（Life Technologies）所生產的分離RNA、脫氧核糖核酸、蛋白質的試劑名為TRIzol試劑。生命科技公司于2014年1月被賽默飛（Thermo Fisher Scientific）收購
MRC，MRC生產的分離核糖核酸、DNA、蛋白質的試劑名為TRI Reagent（Reagent，意為「試劑」）
參考資料 >
TRIzol? 試劑.生命科技官網.2023-11-12
TRIZoI試劑使用說明.杭州新景生物試劑開發有限公司.2023-11-20
TRIZoI試劑使用說明.天津三箭生物技術股份有限公司.2023-11-20
US5346994A.美國專利網站.2023-11-20
Life Technologies.賽默飛官網.2023-11-20
TRI Reagent? RT (RT 111).MRC官網.2023-11-12