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異硫酸胍是一種化學(xué)物質(zhì)，分子式是CH5N3·HSCN。
基本信息
簡稱 GITC
外觀：白色結(jié)晶
熔點(diǎn):115-120℃
PH(4%水溶液):4.5-7.0
紫外吸收(300nm,6M):≤0.1 abs unit
紫外吸收(410nm,6M):≤0.05abs unit
干燥失重:≤0.5%
用途：用于變性裂解細(xì)胞；提取核糖核酸和脫氧核糖核酸。無RNA酶和DNA酶活性
TRIzol是一種新型總RNA抽提試劑，可以直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速破碎細(xì)胞并抑制細(xì)胞釋放出的核酸酶。
提取
異硫氰酸胍法提取制備模板核酸此法主要用于RNA的提取。標(biāo)本為組織細(xì)胞及血清等.
1.異硫氰酸胍消化液
異硫氰酸胍4mol/L
檸檬酸鈉(PH7.0)25mmol/L
β-2-巰基乙醇0.1mol/L
2.消化方法：用50～100ul細(xì)胞懸液及血清，加等體積的異硫氰酸胍消化液振混勻后，或65℃1小時(shí)，或室溫放置數(shù)分鐘，然后加1/10體積的3mmol/LpH5.2的乙酸鈉緩沖液，再加等體積的酚：三氯甲烷，用力振搖約10s，10000r/min，離心5min，取上清加等體積2-丙醇20℃放置3h后，14000r/min離心15min，沉定用75%冰冷乙醇離心洗滌1～2次，真空干燥，沉淀用TE緩沖液溶解即可用于逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增，或放-20℃保存。
參考資料 >