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在沸水浴的條件下,脫氧核糖核酸與二苯胺反應呈現藍色。因此,二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。
配制
A液:1.5克二苯胺(C12H11N)溶于100ml乙酸(乙酸,乙烯O2)中,再加1.5ml濃硫酸,用褐色瓶保存(光下分解)。如冰醋酸呈結晶狀態,則需加溫后待其熔化,再使用。
B液:體積分數為0.2%的乙醛溶液(C2H4O)。
將0.1mlB液加入10mlA液中,制成二苯胺試劑,現配現用。
使用方法
1、配制二苯胺試劑取0.1mLB液,滴入到10mLA液中,混勻。
2、鑒定:取4mLDNA提取液放入試管中,加入4mL二苯胺試劑,混勻后觀察溶液顏色(不變藍)。
用沸水浴加熱。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色)。
3、加熱后冷卻觀察。
脫氧核糖核酸在酸性條件下加熱,其嘌呤堿與脫氧核糖間的糖鍵斷裂,生成嘌呤堿、脫氧核糖和脫氧核苷酸,而2-脫氧核糖在酸性環境中加熱脫水生成ω-羥基-γ-酮基正戊醛,與二苯胺試劑反應生成藍色物質。
參考資料 >