多功能酶標儀,也稱為多功能微孔板檢測儀或多功能微孔板檢測平臺,能夠對基于微孔板的實驗進行多種不同模式的檢測。這類儀器通常具備兩種及以上檢測功能,最少包括“吸收光”和“熒光”,而更高檔次的型號還支持“化學發光”、“生物發光共振能量轉移”、“時間分辨熒光”、“熒光偏振”等功能,甚至還能執行“Western Blot”和“上轉換發光”等高級檢測實驗。
形態特征
多功能酶標儀是一種擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀。某些高端型號不僅支持微孔板上的吸光度(Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)和化學發光(Lum)檢測,而且還支持1cm立式比色皿進行除吸光度之外的熒光強度和化學發光檢測。
分類
功能分類
酶標儀可以根據其功能分為光吸收酶標儀、熒光酶標儀、化學發光酶標儀和多功能酶標儀。其中,光吸收酶標儀主要用于可見光和紫外光吸光度的檢測,熒光酶標儀則用于熒光檢測,化學發光酶標儀則是基于生物化學反應中的自發光特性進行檢測。多功能酶標儀集成了前幾種酶標儀的功能,能夠同時進行光吸收、熒光和化學發光等多種檢測。
濾光方式分類
酶標儀也可以根據其濾光方式進行分類,包括濾光片式酶標儀和光柵式酶標儀。前者通過濾光片輪選擇特定波長進行分光,后者則采用光柵進行分光,能夠獲得任意波長的光。此外,根據通道數量,酶標儀還可以分為單通道和多通道兩類,單通道又細分為自動和手動兩種。
技術特點
1. 光柵和濾光片技術:基于濾光片系統的高靈敏度檢測和基于光柵系統的高靈活度檢測。
2. 檢測模式:包括熒光強度檢測(FI)、熒光偏振檢測(FP)、時間分辨熒光檢測(TRF)、TR-FRET、高性能發光檢測、紫外/可見吸收光、AlphaScreen / AlphaLISA、Western Blot等。
3. 兼容微量檢測板:可進行體積為2 μL或4μL的檢測,最多可同時處理60多個微量樣品。
4. 光柵型單色器系統及帶寬可調:光路集成光柵單色器,實現波長連續可調,且加入可變帶寬設計增加檢測靈活性。
5. 可結合濾光片系統:濾光片顯著提高多種檢測功能的靈敏度。
主要參數
1. 光密度測讀模式:波長范圍230~1000nm,精確選擇波長1nm;帶寬4 nm;波長準確度±2.0nm;波長重現性±1.0nm;測讀范圍0~4.0 OD;光分辨度0.001 OD;測讀準確度(微孔板)< ±0.010 OD ±1.0%;(比色杯)< ±0.010 OD ±1.0%;測讀精確度< ±0.003 OD ±1.0%;雜散光0.05% @ 230 nm;微孔板測讀時間96: 18 秒384: 49 秒;溫度范圍室溫+4~45度。
2. 時間分辨熒光法(TRF):波長范圍濾光片: 波長可隨意定制,光柵: 250 - 850 nm,步進1nm;數據采集可調;測讀次數1~100flashes;測讀延遲0~600usec;讀取數據積分時間50~1500usec;帶寬9nm, 15nm,25nm;靈敏度10fM/孔 銪元素(96孔頂讀模式);讀取速度96孔板17秒,384孔48秒。
3. 熒光偏振(FL):波長選擇方式光柵全波長(頂部)或深部阻擋濾光片(頂部);波長范圍300 - 750 nm;檢測靈敏度3nM熒光素/孔時,<5mp SD;讀取速度96孔板42秒,384孔123秒。
4. 化學發光模式(Lum):連續波長范圍300~850nm;靈敏度8amol ATP(384孔頂讀模式);讀取速度96孔板120秒,384孔420秒;光交叉<0.4%。
應用領域
2. 所有微孔板的ELISAs、酶動力學,測試藥物解離代謝測試。
3. 細胞毒及細胞發育、死亡測試。
4. Caspase-3 以及蛋白酶測試。
5. cAMP的結合位點測試。
6. IMAP激酶測試(激酶藥物篩選)。
8. 綠色熒光蛋白的測試。
9. FRET(熒光能量轉移) and TR-FRET(時間分辨的熒光能量轉移,針對快釋放性小含量受體的檢測)測試。
10. HTRF 測試 (M5e only)。
11. ADME-Tox(藥物吸收,分布,代謝和排泄和毒性陣列)測試。
12. 親油性基團測試。
13. 人血球蛋白結合測試。
14. 膜滲透測試(PAMPA平行人造膜透性組合)。
15. 溶解度測試。
16. 體外細胞侵襲培養系統測試。
17. Delfia(分布鑭系熒光免疫分析)測試。
使用方法
首先將抗原(或抗體)物質吸附(醫學上稱“包被”)在樣品盤中(國際上通用的樣品盤是96 標準微孔反應板);再將待測樣品(如血液、體液等)加入樣品盤;于是待測未知的抗體(或抗原)與包被的抗原(或抗體)相結合,成為抗體抗原配位化合物。當依次加入酶結合物(即酶標記抗體或酶標記抗原)和酶的底物時便產生呈色反應,呈色程度與被檢測樣品中待測抗體(或抗原)的量相關,據此就可以得出定性或定量的檢測結果。
用途
酶標儀是一種用途廣泛的生物檢驗醫療設備,利用酶聯免疫分析法,根據酶標記原理,根據呈色物的有、無和呈色深淺進行定性或定量分析。這是一種極具生命力的免疫學技術。可用于單克隆抗體篩分、凝血分、抗生素靈敏度檢驗,以及其它需要進行比色的分析工作中。該儀器適用于臨床檢驗、微生物學、流行病學、免疫學、內分泌學以及農林科學等領域。廣泛用于醫院、血站、防疫站、生物制品等部門。我國衛生行政主管部門已明確規定,對多發常見的肝炎病診斷,不能用目測進行,必須用酶標儀判斷。沒有酶標儀或不用酶標儀的醫院不能上等級,也沒有判斷肝炎的資格和權利。對于有蔓延趨勢的艾滋病毒的判斷,必須建立專門的艾滋病實驗室并采用酶標儀進行判斷。
參考資料 >
多功能酶標儀.TECAN.2024-09-18
多功能酶標儀.美谷分子儀器有限公司.2024-09-18
淺談多功能酶標儀選擇的要素.丁香實驗.2024-09-18