吡羅紅,英文名為Xanthylium,3,6-胺醚(dimethylamino)-, 氯化物,分子式是C17H19ClN2O。又名派洛寧G,吡羅紅使核糖核酸呈現紅色,常用于檢測細胞中RNA的分布,常與甲基綠一起混用即為甲基綠—派洛寧(甲基 green-pyronin),堿性染料,它分別能與細胞內的脫氧核糖核酸、RNA結合呈現不同顏色。
簡介
別名:Ammonium,[6-(dimethylamino)-3H-xanthen-3-ylidene]dimethyl-, chloride (8CI);
Methanaminium, N-[6-(dimethylamino)-3H-xanthen-3-ylidene]-N-methyl-, 氯化物;
Pyronine G (6CI);
Xanthylium, 3,6-胺醚(dimethylamino)-, chloride (9CI);
3,6-Bis(dimethylamino)xanthylium chloride;
C.I. 45005;
Pyronin G;
Pyronin GS;
Pyronin Y;
Pyronin 黃色;
Pyronine;
Pyronine GS;
Pyronine GY;
Pyronine Y;
Schultz no. 853
危險類別碼:40:可能有不可挽回的作用的危險
染色原理
即吡羅紅G,又名派洛寧G,吡羅紅使核糖核酸呈現紅色,常用于檢測細胞中RNA的分布,。當甲基綠與派洛寧作為混合染料時,甲基綠與染色質中脫氧核糖核酸選擇性結合顯示綠色或藍色;派洛寧與核仁、細胞質中的RNA選擇性結合顯示紅色。其原因可能是兩種染料的混合染液中有競爭作用,同時兩種核酸分子都是多聚體,而其聚合程度有所不同。甲基綠易與聚合程度高的DNA結合呈現綠色。而派洛寧則與聚合程度較低的RNA結合呈現紅色(但解聚的DNA也能和派洛寧結合呈現紅色)。即核糖核酸對派洛寧親和力大,被染成紅色,而DNA對甲基綠親和力大,被染成綠色。
使用配制方法
關于吡羅紅和甲基綠分裝粉的使用方法
試劑及配制方法
試劑
質量分數為0.9%的NaCl溶液,乙酸鈉,乙酸,蒸餾水,吡羅紅甲基綠混裝粉。如果化學試劑商店沒有吡羅紅甲基綠混裝粉,可以分別購買甲基綠和吡羅紅G,然后按A液的第二種方法配制。
配制步驟
①染色劑A液的兩種配制方法
第一種方法:取吡羅紅甲基綠粉1 g,加入到100 mL蒸餾水中溶解,然后用濾紙過濾,將濾液放入褐色瓶中備用。
第二種方法:取甲基綠2 g溶于98 mL蒸餾水中,取吡羅紅G 5 g溶于95 mL蒸餾水中。取6 mL甲基綠溶液和2 mL吡羅紅溶液加入到16 mL蒸餾水中,即為A液,放入棕色瓶中備用。(注意:用于核酸染色的是吡羅紅G,請不要錯買吡羅紅B。)
②染色劑B液的配制方法 B液是一種緩沖液,由乙酸鈉和乙酸混合而成。先取乙酸鈉16.4 g,用蒸餾水溶解至1 000 mL備用;再取乙酸12 mL,用蒸餾水稀釋至1 000 mL備用。取配好的乙酸鈉溶液30 mL和稀釋的乙酸20 mL,加蒸餾水50 mL,配成pH為4.8的B液(緩沖液)。
③染色劑的配制 染色劑是由A液、B液混合配制而成的。取A液20 mL和B液80 mL混合,就是實驗中所用的吡羅紅甲基綠染色劑。應該注意的是該試劑應現配現用。
參考資料 >