厭氧培養（anaerobic culture）是指在沒有分子態氧存在的環境中對微生物進行的培養過程，主要針對的是兼性厭氧菌和專性厭氧菌。
分類
厭氧培養因其不同的實驗目的而采用多種方法，主要包括以下幾種：
隔離空氣法
這種方法包括在三角瓶底部填充液體培養基，通過煮沸去除空氣后再迅速冷卻以接種細菌。當發酵過程中產生氫氣和二氧化碳時，可以進一步確認這是厭氧細菌。此外，還可以使用瓊脂培養基進行穿刺培養或將培養物移植至液體培養基和固體斜面上，隨后添加一層礦物油或礦物油，以防止其與空氣接觸。
真空法
此方法涉及將微生物置于耐壓容器中，通過真空處理或填充二氧化碳、氫氣、氮氣、氬等氣體來除去預先混合的少量氧氣。在氫氣存在的情況下，可以通過置換后飛濺火花等方式消除殘留的氧氣。
化學去氧法
這一方法利用堿性鄰苯三酚、白磷、鉻和硫酸等化學物質進行去氧處理，也可以使用好氧細菌及其萌發的種子，通過它們的呼吸作用消耗氧氣。
加入還原劑
在培養基中加入還原劑，如0.1%的巰基乙酸鈉鹽或0.01%的硫化鈉，有助于創造厭氧條件。這些方法可以結合使用，以更精確地鑒定厭氧菌。為了驗證厭氧性，可以在堿性條件下加入葡萄糖并加熱，同時加入還原型次甲藍溶液，使其保持脫色狀態。
培養工藝
厭氧培養技術的發展使得微生物厭氧培養變得更加便捷和高效。常見的厭氧培養方法包括：
厭氧產氣袋法
這是一種常用的厭氧培養方法，其中特定容量的產氣袋能夠吸收相應體積的氧氣并將其轉化為二氧化碳。例如，2.5L的產氣袋適合用于2.5L容積的培養，而3.5L的產氣袋則適用于3.5L的培養。需要注意的是，產氣袋的數量和培養物的裝載量都需要按照預先設定的比例進行匹配，以確保培養條件的一致性。日本三菱生產的厭氧培養罐有兩種尺寸，分別為2.5L和7.0L，分別配備相應的產氣袋，以維持所需的氧氣濃度和二氧化碳濃度。這兩種培養罐均為長方形設計，且產氣袋在使用后不會產生負壓，因此無需設置泄壓孔。
厭氧袋法
厭氧袋是一種透明且不透氣的塑料袋，內部包含氣體發生管、美蘭指示劑管、鈀催化劑管和干燥劑。在接種了平板后，應盡可能排出袋內的空氣并密封袋口。首先折斷氣體發生管，然后再折斷美蘭指示劑管，這樣能夠在半小時內創造出無氧環境。如果顏色未發生變化，則表明袋內已經達到了厭氧狀態，此時可以進行孵化。
厭氧手套箱法
厭氧手套箱被認為是目前國際上公認的最佳厭氧菌培養設備之一。它是一個封閉的大型金屬箱，前面設有透明的聚甲基丙烯酸甲酯面板，并配有兩個手套，允許用戶在箱內進行操作。箱體一側設有交換室，帶有內外兩扇門，外部門開啟后，物品可放入交換室，關閉外部門后進行抽氣和換氣，直至箱體內形成厭氧環境。之后，用戶可通過手套將物品轉移至箱內并關閉內部門。箱內始終保持厭氧狀態，這得益于充入的氫氣在鈀催化劑的作用下與箱內剩余的氧氣反應生成水。該手套箱不僅可以調節溫度，還內置孵化器或孵化器附件，以便觀察厭氧菌菌落。這種厭氧箱特別適合大規模培養厭氧菌的研究，同時也可用于預還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環境和溫度等參數均可實現自動化控制。
參考資料 >
厭氧培養的定義.分析測試百科網.2024-10-29
厭氧培養法包括什么.愛問知識人.2024-10-29