溶血空斑實驗是一種評估機體體液免疫功能的方法，通過觀察在特定條件下形成的空斑數量來確定抗體形成細胞的存在及其活性。
原理
溶血空斑實驗的基本原理是，當含有溶血性抗體的B淋巴細胞在補體的作用下溶解周圍的綿羊紅細胞時，會在周圍形成一個可見的空斑。這個空斑代表著一個抗體形成細胞，因此空斑的數量可以反映出機體的體液免疫功能狀態。
操作方法
目前常用的是SPA-SRBC溶血性貧血空斑試驗。這種方法使用了SPA（蛋白質A）與SRBC（綿羊紅細胞）相結合的特點，提高了實驗的靈敏度和適用范圍。在該測試系統中，加入了抗人Ig抗體，能夠與受檢細胞產生的免疫球蛋白結合形成配位化合物。這些復合物上的Fc段會與連接在SRBC上的SPA結合，從而激活補體，使得SRBC溶解并形成空斑。這種方法適用于檢測人體外周血中的IgG產生細胞，且不受抗體特異性的限制。通過使用不同類型的抗Ig抗體包被SRBC，可以分別測定相應免疫球蛋白的產生細胞，這種試驗被稱為反相空斑形成試驗。
其他測試方法
直接法
傳統的溶血性貧血空斑試驗主要用于檢測實驗動物的抗體形成細胞功能。在這種方法中，先對小鼠進行SRBC免疫，四天后取出脾細胞，將其與SRBC和補體混合，置于溫熱的瓊脂溶液中，最終形成一層薄片。由于脾細胞內的抗體生成細胞能夠釋放抗SRBC抗體，這些抗體在補體作用下會導致SRBC溶血，形成肉眼可見的圓形透明區域，即溶血空斑。每個空斑對應著一個抗體形成細胞，空斑的大小則反映了抗體生成細胞產生抗體的能力。這種直接法主要檢測的是IgM生成細胞，而對于其他類型的Ig，由于其溶血性貧血效應較低，無法直接檢測，可以通過間接法進行檢測。
間接法
間接法是在小鼠脾細胞和SRBC混合時，添加抗鼠Ig抗體，如兔抗鼠Ig，以促進抗體與細胞所產生的IgG或IgA與抗Ig抗體結合成配位化合物。這些復合物能夠激活補體途徑，導致SRBC發生溶血，形成間接空斑。然而，無論是直接法還是間接法，都只能檢測抗紅細胞抗體的產生細胞，并且需要預先免疫，這使得它們難以應用于人類抗體產生情況的檢測。如果采用特殊方法將SRBC與其他抗原結合，則可以檢測與該抗原對應的抗體產生細胞，這種非紅細胞抗體溶血性貧血空斑試驗被稱為空斑形成試驗，具有更廣泛的應用范圍。
參考資料 >
溶血空斑試驗(小室液相法)——萬融實驗. 實驗室小知識.2024-10-31
小室液相法.丁香通.2024-10-31
溶血空斑試驗.39健康.2024-10-31