福林試劑是一種由多種化合物組成的混合物，常用于通過比色法測定蛋白質或多肽分子中的酚基酪氨酸或色氨酸。
原理
福林試劑的工作原理在于，當蛋白質或多肽分子中含有酚基酪氨酸或色氨酸時，在堿性條件下，這些物質能夠還原磷鉬酸化合物，形成藍色的鉬藍和鎢藍化合物。這種藍色的顏色深度與蛋白質的含量成正比例關系，因此可以通過比色法來測量蛋白質的含量。
配制方法
福林試劑的配制過程包括以下步驟：首先，在2000毫升的磨口回流裝置中加入鎢酸鈉（Na2WO4·2H2O）100克，鉬酸鈉（NaMoO4·2H2O）25克，以及700毫升的水和50毫升的85%磷酸。然后，加入100毫升的濃鹽酸并用文火回流10小時。在此過程中，加入150克的硫酸鋰（Li2SO4）和50毫升的蒸餾水，攪拌均勻后再去除冷凝器。接著，加入少量的液體溴，并再次蒸煮15分鐘，以驅除殘留的溴并去除顏色。如果溶液呈現綠色，則需要再次添加液溴并繼續蒸煮，直到溶液變為黃色為止。冷卻后，將溶液定容至1000毫升，并進行過濾。最終得到的濾液應該被儲存在棕色瓶中。
測定方法
使用福林試劑進行測定的方法如下：先將1毫升的標準蛋白溶液和5毫升0.025摩爾/升pH值為7.5的磷酸緩沖液加入試管中，在40攝氏度下保溫10分鐘后，迅速加入1毫升的酶液，繼續保溫15分鐘。隨后，加入3毫升10%的三氯乙酸以終止反應。接下來，取出1毫升的濾液，加入5毫升0.55摩爾/升的碳酸鈉溶液和0.5毫升的福林試劑。在40攝氏度的水浴中加熱10分鐘后，觀察其顏色變化并在波長為680納米的位置進行比色分析。
參考資料 >
實驗四福林—酚試劑法測定血清總蛋白.豆丁網.2024-10-24
福林(Folin)-酚試劑法測定-完整版.豆丁網.2024-10-24
Folin(福林)-酚試劑法(Lowry法).豆丁網.2024-10-24