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核苷酸激酶
來源:互聯(lián)網(wǎng)

核酸激酶是由T偶數(shù)噬菌體所感染的大腸桿菌分離出來的酶。

正文

核苷酸激酶

本酶具有以下活性:

1.5'-OH末端寡聚核苷酸的磷酸化:5'-OH+NTP→5'-P+NDP

2.5'-P末端寡核苷酸的去磷酸化:5'-P+NDP→5'-OH+NTP(最適pH:6.2)

3.交換反應(yīng):5'-P+NTP+NDP5'-P+NDP+NTP

4.3'磷酸酶(Phosphatase)活性:

(Poly)核苷酸3'-P→(Poly)nucleotide3'-OH+Pi(最適pH:5.9)

※磷酸酶活性在肽鏈的C-末端附近,激酶活性在N-末端附近。

簡介

活性定義

以MicrococcalNuclease處理的小牛胸腺脫氧核糖核酸為底物,在37℃.pH7.6的條件下,30分鐘內(nèi)使1nmol的[g-32P]atp摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。

純度

10U的本酶和1mg的l-HindIII片段在37℃下反應(yīng)24小時,DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。

1U的本酶和1mg的16S,23SrRNA在37℃下反應(yīng)24小時,RNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。

用途

DNA及核糖核酸5'末端的標記。

合成DNA接頭(Linker)的5'末端磷酸化。

相關(guān)資料

由T偶數(shù)噬菌體所感染的大腸桿菌分離出來的酶,能催化atp的γ-磷酸轉(zhuǎn)移到脫氧核糖核酸或RNA的5′-OH末端生成ADP的反應(yīng)。EC2.7.1.78。因為此酶的催化反應(yīng)特異性很高,可用32P標記的ATP特異地標記多核苷酸的5′末端。廣泛應(yīng)用于多核苷酸的鏈長的測定和5′末端核苷酸排列的確定等核酸結(jié)構(gòu)的研究。

核酸酸基擴增技術(shù)(SELEX)可從極大容量的隨機寡聚核苷酸文庫中篩選得到與靶分子高特異性和高親和力結(jié)合的核酸配基。對寡核苷酸進行化學(xué)修飾,可以提高核酸配基的穩(wěn)定性,增加其功能多樣性及生物利用度。SELEX在基礎(chǔ)研究、診斷和治療試劑的研制及藥物篩選等領(lǐng)域有廣泛用途。

參考資料

http://all.zcom.com/mag2/zirankexue/shengwu/

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