來源：互聯網
體外轉錄是一種在無細胞系統中模擬生物體內轉錄過程的技術。通過提供適當的條件，包括核糖核酸轉錄酶、NTP等物質，以及將脫氧核糖核酸作為模板，可以實現對特定基因的轉錄控制，以及轉錄后RNA的定制化用途。
轉錄條件
為了確保體外轉錄的成功，轉錄模板需要滿足以下條件：
1. 基因組全長克隆時，在正向引物5'端添加T7啟動子序列。
2. 使用T7啟動子作為體外轉錄的啟動子，且在其后靶位序列為連續三個G時，轉錄效率最高。
3. 正向引物5'端添加一個帽子G，有助于提高體外轉錄RNA分子的侵染活性。
注意事項
1. 模板DNA必須包含T7啟動子位點，并且應為RNase-free級別。在質粒提取過程中，若使用了RNase，則必須通過苯酚三氯甲烷處理等方式去除RNase。
參考資料 >
體外轉錄及翻譯.體外轉錄及翻譯.2024-10-24
體外轉錄(IVT)快速上手 | IVT轉錄比影響因素匯總.微信公眾平臺.2024-10-24
體外轉錄操作指南和使用推薦.體外轉錄操作指南和使用推薦.2024-10-24