物理作圖是一種用于確定遺傳標(biāo)記在基因組上位置和距離的技術(shù)，通常使用物理尺度（如核苷酸堿基對(duì)的基因）來(lái)標(biāo)注這些標(biāo)記。物理作圖的結(jié)果可以與遺傳圖譜相比較，兩者互為補(bǔ)充，共同服務(wù)于基因組圖譜的研究。
原理
物理作圖的基本原理是以物理尺度（如堿基對(duì)的基因）來(lái)標(biāo)明各種遺傳標(biāo)記在基因組上的位置和距離。
方法
限制性酶圖譜
這種方法主要針對(duì)脫氧核糖核酸分子長(zhǎng)度在50kb以下的片段，但對(duì)于大于50kb的DNA分子，則需要選擇稀有切點(diǎn)的內(nèi)切酶進(jìn)行酶切。具體操作包括使用識(shí)別多個(gè)核苷酸的內(nèi)切酶，如NotI，以及選擇其酶切位點(diǎn)在基因組中出現(xiàn)頻率較低的內(nèi)切酶。
熒光原位雜交
熒光原位雜交技術(shù)（FISH）是另一種常用的物理圖譜構(gòu)建方法。該技術(shù)通過(guò)熒光標(biāo)記的探針與DNA分子雜交，在顯微鏡下直接觀察染色體上的雜交信號(hào)。探針可以使用熒光或同位素標(biāo)記，而染色體上出現(xiàn)雜交信號(hào)的位置即代表探針脫氧核糖核酸在染色體上的圖譜位點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，首先制備有絲分裂中期的細(xì)胞片，然后將染色體變性成單鏈狀態(tài)，隨后加入變性后的DNA探針并進(jìn)行保溫處理，最終記錄結(jié)果。在FISH中，一個(gè)克隆的DNA片段即可作為雜交的探針。
序列標(biāo)簽位點(diǎn)
序列標(biāo)簽位點(diǎn)（STS）法也是一種常見(jiàn)的物理圖譜構(gòu)建方法。這種技術(shù)利用已知序列作為標(biāo)簽的位點(diǎn)作為探針，與基因組DNA雜交，從而繪制出物理圖譜。作為STS，該序列應(yīng)具有兩個(gè)特點(diǎn)：一是序列已知，便于PCR檢測(cè)；二是基因組中只有一個(gè)位點(diǎn)，不存在重復(fù)。
參考資料 >
物理作圖方法和標(biāo)準(zhǔn).百度文庫(kù).2024-10-26
限制酶圖譜.《中國(guó)大百科全書(shū)》第三版網(wǎng)絡(luò)版.2024-10-26
熒光原位雜交.知乎專欄.2024-10-26