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核酸雜交技術
來源:互聯(lián)網

核酸雜交技術是分子生物學的一種標準技術,主要用于檢測脫氧核糖核酸核糖核酸分子中的特定序列。

技術原理

核酸雜交技術的基本過程包括將DNA或RNA轉移至硝化纖維素或尼龍膜上,并使用放射性或非放射性標記的單鏈DNA或RNA探針進行雜交。在雜交過程中,探針通過氫鍵與目標序列相結合,隨后去除未結合的自由探針,最終通過放射自顯影或顯色反應來檢測特異性結合的探針。

分類及方法

DNA印跡雜交

DNA印跡雜交分為兩種方法:一是將DNA或RNA溶液直接點樣于硝酸纖維素膜或尼龍膜上;二是利用瓊脂糖凝膠電泳脫氧核糖核酸核糖核酸片段轉移到膜上,其中DNA在電泳前會經過限制性內切酶的處理。

RNA印跡雜交

斑點雜交

斑點雜交是指將少量核酸樣品點樣在硝化纖維素濾膜上,然后在80℃下烘焙以確保樣品牢固地固定在膜上。接下來,使用探針進行雜交。尼龍膜,尤其是聚偏二氟乙烯(PVDF),具有更高的DNA結合能力,且堅固易操作。點樣的方法可以手動完成,也可以使用自動點樣設備。檢測時,可以選擇放射性探針進行自顯影或者使用非放射性探針進行顯色。

原位雜交

原位雜交是在保持細胞形態(tài)的情況下,在細胞內部進行雜交。這種方法適用于對脫氧核糖核酸核糖核酸的分析。熒光原位雜交(FISH)特別適合用于染色體DNA的分析,它不僅可以應用于細胞分裂中期,還可以在分裂間期核中診斷染色體的變化。

參考資料 >

核酸雜交技術.知乎.2024-11-04

硝酸纖維素.方都化工網.2024-11-04

DNA印跡雜交.文庫.2024-11-04

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