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半定量RT-PCR(Semi-quantitative RT-PCR)是一種常用于估計核糖核酸水平的技術(shù)。它結(jié)合了逆轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription,將RNA轉(zhuǎn)錄為脫氧核糖核酸)和聚合酶鏈式反應(PCR),通過比較目標基因產(chǎn)物和內(nèi)參基因產(chǎn)物的相對豐度來估計目標基因在不同樣本中的表達水平。由于使用了內(nèi)參基因作為標準,因此這種方法稱為“半定量”。
半定量分析
在進行半定量RT-PCR時,首先利用反轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)錄為相應的DNA,接著利用PCR對所得的DNA進行擴增。通過分析PCR產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠電泳中的帶狀的相對強度來估計不同樣品中核糖核酸的相對水平。因此,半定量RT-PCR提供了一種相對的、快速的方法來比較樣品中RNA的相對量,但不能提供絕對的RNA數(shù)量。
應用
該技術(shù)在基因表達研究和其他分子生物學實驗中得到了廣泛應用。
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