負染色法（陽性 staining），又稱“襯托染色法”或“間接染色法”，是一種在電子顯微鏡下觀察試樣微細結構的方法。該方法通過使用高電子密度物質填充生物試樣間隙，產生對比以觀察未直接染色的試樣。它適用于不透光液體標本的鏡檢，尤其對于不易染色的細菌或病毒。
染色原理
負染色法需要使用酸性染料來染色，如伊紅或苯胺黑。因為細菌體表面帶負電，而酸性染料的色原也帶負電，所以色原只能將背景染色，才能使沒有染色的細胞很容易的被觀察到。一些染色劑，如四氧化鋨和鐵氰化物，化學活性非常強。作為強氧化劑，它們主要與交鍵類脂和不飽和碳碳鍵反應，從而改變樣本組織的生物膜特性并將其染色。
染色劑
就透射電子顯微鏡來說，原子所帶電子的不透明度與其原子序數有關，也就是和核外電子數有關。所以應選擇有較強的電子散射能力且易被生物吸附的試劑作為負染色劑，一些常用的負染色劑有仲鉬酸銨、乙酸、甲酸鈾酰、12-磷鎢酸、四氧化鋨、鋨鐵氰化鉀等。
使用負染色法可以看到普通光學顯微鏡下無法看清的結構。該方法主要用于觀察病毒、細菌、細菌鞭毛、生物膜等結構，這些結構的電子散射能力均較低。
染色過程
在亮視野顯微鏡術中通常使用黑色染料（如苯胺黑）進行負染色。如將載玻片上濕的細菌培養物標本與負染色劑混合再進行干燥后觀察。用顯微鏡觀察細菌菌體或它們的孢子時，會發現圖像的背景很暗，而菌體很明亮，這也是負染色法的名稱來由。如果沒有合適的染料，也可以使用普通的防水熒光筆來進行負染色。
材料與步驟
試劑：苯胺黑染色液。
器材：酒精燈（或本生燈）、接種環、染色盤、玻片、拭鏡紙及顯微鏡。
步驟：
1. 取一小滴苯胺黑染色液，滴于潔凈玻片一端。
2. 以無菌操作取一接種環之培養，置入苯胺黑染色液中，混勻。
3. 取另一玻片（或蓋玻片）一端置于苯胺黑色液前，并呈30度狀態，向另一端推去，使混合液成一薄涂膜。
4. 將玻片置于空氣中干燥，不宜以熱固定。
5. 以油鏡觀察之。
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