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去磷酸化：是磷酸基團的除去，對許多生物起著“開/關(guān)”作用。
正文
防止質(zhì)粒載體的自身連接，最常用于質(zhì)粒進行單酶切連接時。
去磷酸化是由于脫氧核糖核酸連接酶催化DNA連接時需要有磷酸基團的存在，載體在經(jīng)酶切后會在切點端保留一個磷酸基團。
載體去磷酸化后因自身5'端無磷酸基團，因而不可以和自身3'端連接。但是，載體去磷酸化后3’還是有羥基的，可以與目的片段的5'端磷酸基團連接。載體的5'端和目的片斷的3’-OH不能成鍵，因而形成一個雙鏈各有一個切口的雙鏈環(huán)狀DNA，雙鏈的切口會在轉(zhuǎn)化入大腸桿菌后，在復(fù)制的過程中被修復(fù)。
若不進行去磷酸化處理，在連接反應(yīng)中載體自身會優(yōu)先進行連接，導(dǎo)致目的片段插入率降低。
參考資料 >