超薄切片(Ultrathin sectioning)是指用于電子顯微鏡觀察的極薄切片,其厚度通常在40~50納米之間。
取材的基本要求
動(dòng)作迅速,組織從活體取下后應(yīng)在最短時(shí)間內(nèi)投入2.5%戊二醛固定液。
所取組織的體積要小,一般不超過1mm×1mm×1mm。也可將組織修成1mm×1mm×2mm大小長(zhǎng)條形。
機(jī)械損傷要小,解剖器械應(yīng)鋒利,操作宜輕,避免牽拉、挫傷與擠壓。
操作最好在低溫(0℃~4℃)下進(jìn)行,以降低酶的活性,防止細(xì)胞自溶。
取材部位要準(zhǔn)確。
取材過程
將取出的組織放在潔凈的蠟版上,滴一滴預(yù)冷的固定液,用兩片新的、鋒利的刀片成“拉鋸式”將組織切下并修小,然后用牙簽或鑷子將組織塊移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果組織帶有較多的血液和組織液,應(yīng)先用固定液洗幾遍,然后再切成小塊固定。
制備過程
超薄切片的制作使用的是超薄切片機(jī),以及玻璃刀或鉆石刀作為切割工具。為了能夠成功地制成薄片,被包埋的標(biāo)本的包埋劑必須具有足夠的硬度,這通常通過沒藥樹聚合來實(shí)現(xiàn)。具體的方法包括:首先使用四氧化鋨和戊二醛固定樣品,隨后使用丙酮逐步去除水分,接著使用ep進(jìn)行包埋。接下來,利用熱膨脹或機(jī)械伸縮的方式進(jìn)行切片,最后使用重金屬如鈾、鉛等鹽類進(jìn)行染色。
參考資料 >
超薄切片技術(shù) .百度文庫.2024-11-28
超薄切片技術(shù)與電鏡下的樣品觀察.百測(cè)網(wǎng) .2024-11-28
獲得高質(zhì)量的超薄切片.徠卡顯微系統(tǒng) .2024-11-28