異質系克隆
是指在某些放線菌中，兩個多重標記的營養(yǎng)缺陷型親本雜交時，供體染色體片段進入受體細胞后形成的局部雜合核在分裂過程中發(fā)生染色體交換和減數。結果在同一菌絲體形成各種單倍體種組孢子。這樣由一個雜合核演化繁殖形成的菌落叫異質系克隆。
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馬—牛異種克隆胚胎及其線粒體異質性的研究
沈彥軍
【摘要】：本研究以新疆伊犁馬的體細胞為供體，牛卵母細胞為受體，構建馬—牛異種克隆胚胎，探討了馬—牛異種克隆體外培養(yǎng)發(fā)育的影響因素，建立了馬—牛異種克隆胚胎的體外培養(yǎng)體系，此外，本研究還利用Taqman定量PCR法，對馬—牛異種克隆胚胎附植前各時期胚胎中的線粒體組成進行定量分析。結果表明，牛的卵母細胞能支持馬體細胞進行重編程，馬—牛異種克隆胚胎線粒體存在異質性。本研究對探討利用異種克隆技術繁育優(yōu)良馬匹和探索異種克隆機制奠定了一定的基礎，提供了參考依據。 1.馬體細胞系的建立: 利用貼壁培養(yǎng)法建立了耳成纖維細胞系、胎兒成纖維細胞系和顆粒細胞系，并分別對這三種細胞系進行了細胞生物學特征觀察和染色體核型及倍性統(tǒng)計分析。所建立的三種細胞系形態(tài)均一、染色體倍性穩(wěn)定，完全滿足體細胞核移植對供體細胞的要求。 2.馬—牛無透明帶卵異種克隆胚胎的構建及體外培養(yǎng)體系的建立: ①本研究創(chuàng)建了顯微擠壓去核與無透明帶手工融合相結合方法構建馬—牛異種克隆胚胎。分析了不同激活方法、不同體外培養(yǎng)液、體細胞不同處理方式以及顯微注射核移植方法對馬—牛異種重構胚融合率和胚胎發(fā)育的影響。結果表明，利用接觸抑制調節(jié)的耳成纖維細胞為供體，采用無透明帶手工融合法構建馬—牛異種重構胚具有較高的融合率(90.33%),并且經A23187處理5min+6-4-二甲氨基吡啶處理6h激活后，用mCR1aa體外培養(yǎng)液培養(yǎng)，卵裂率較高(83.65%),且卵裂球大小均一、碎片少、胚胎質量較高，并發(fā)育到囊胚(2.72%)。 ②通過對馬—牛異種克隆與牛的同種克隆的發(fā)育能力進行比較，發(fā)現牛的卵母細胞能夠支持馬的供體細胞去分化，進行核重編程。但是由于二者的物種距離較遠，異種克隆胚胎的發(fā)育能力遠低于同種克隆胚胎，囊胚率為(2.71% vs 37.48%)。 3.馬—牛異種克隆胚胎附植前各時期胚胎中的線粒體組成進行定量分析: ①在所檢測的七個胚胎發(fā)育前期的馬—牛異種克隆胚胎中，線粒體存在異質性，并且馬的線粒體相對含量較少，只占牛的0.08%(異常桑葚胚期)～0.42%(囊胚期)。 ②受體牛的mtDNA拷貝數由1-細胞期到4-細胞呈逐漸增加趨勢，從8-細胞期到桑葚胚期，呈逐漸減少趨勢，而馬的mtDNA拷貝數在1-細胞期到囊胚期整體呈現增長趨勢。并且在8-細胞期，二者的線粒體拷貝數都減少。因此，推測馬—牛異種克隆胚胎在8-細胞～16細胞期發(fā)生MET,并且胚胎基因組支持供體馬的線粒體的遺傳復制。 ③在桑葚胚期供體馬的mtDNA和受體牛的mtDNA拷貝數都發(fā)生不同程度的的減少，分別減少到159和1.84×105,而且二者的比值也銳減到0.09%,顯著低于1-細胞期。推測線粒體和核基因組之間的相互作用出現紊亂，并導致異種克隆胚胎的發(fā)育停滯，其具體機制還需進一步研究。
【關鍵詞】：馬牛異種克隆線粒體實時定量PCR
【學位授予單位】：中國農業(yè)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：S821;S823;Q813
【DOI】：CNKI:CDMD:2.2009.152732
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