密度梯度離心是一種利用離心力場(chǎng)的作用使細(xì)胞分層、分離的技術(shù)。這種方法使用一種介質(zhì)在離心管內(nèi)形成連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，然后將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部。常見(jiàn)的介質(zhì)包括氯化銫、蔗糖和多聚蔗糖。
原理
密度梯度離心的原理是基于不同顆粒之間的沉降系數(shù)差異。在一定的離心力作用下，顆粒會(huì)以不同的速度沉降，最終在密度梯度的不同區(qū)域內(nèi)形成區(qū)帶。
區(qū)帶離心法
區(qū)帶離心法是一種將樣品加入惰性梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉降或沉降平衡的方法。這種技術(shù)能夠?qū)㈩w粒分配到梯度中特定的位置，從而形成不同的區(qū)帶。區(qū)帶離心法的優(yōu)點(diǎn)在于分離效果好，能夠一次性獲得較為純凈的顆粒，并且適用于廣泛的樣品類型。然而，它的缺點(diǎn)是離心時(shí)間長(zhǎng)，需要制備惰性梯度介質(zhì)溶液，并且操作過(guò)程嚴(yán)格，難以掌握。
差速區(qū)帶離心法
差速區(qū)帶離心法適用于分離具有一定沉降系數(shù)差的顆粒，或者分子量相差三倍的蛋白質(zhì)。在這種方法中，離心管首先裝有密度梯度介質(zhì)溶液，樣品液則添加在梯度介質(zhì)的液面上。離心過(guò)程中，顆粒按照各自的沉降速度向下沉降，最終形成一系列清晰的不連續(xù)區(qū)帶。這種方法的關(guān)鍵是選擇適當(dāng)?shù)碾x心轉(zhuǎn)速和時(shí)間。
等密度區(qū)帶離心法
等密度區(qū)帶離心法則是通過(guò)離心形成梯度來(lái)分離樣品顆粒。在這種方法中，樣品顆粒會(huì)上浮至與其密度相等的等密度點(diǎn)，形成多個(gè)不同的區(qū)帶。等密度區(qū)帶離心法的分離效率主要取決于樣品顆粒的浮力密度差，而不是顆粒的大小和形狀。這種方法常用于分離核酸、亞細(xì)胞器以及復(fù)合蛋白質(zhì)。
介質(zhì)要求
為了確保密度梯度離心的成功，使用的介質(zhì)應(yīng)具備以下特性：能夠產(chǎn)生密度梯度，且隨著密度增加，粘度不應(yīng)顯著升高；pH值接近中性或易于調(diào)整為中性；濃度較大時(shí)滲透壓不宜過(guò)高；并且對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性。
參考資料 >
密度梯度離心超濾:高效分離純化生物大分子的利器.百度愛(ài)采購(gòu).2024-10-25
密度梯度離心方法:什么是密度梯度離心法.百度愛(ài)采購(gòu).2024-10-25
實(shí)驗(yàn)技術(shù) | 差速離心法&密度梯度離心法.微信公眾平臺(tái).2024-10-25