免疫酶技術是一種利用酶的高效催化作用與抗原抗體反應的特異性的結合來實現物質測定的方法。這一技術自1966年起開始應用于抗原定位，隨著1971年Engvall和Perlmann發表的酶聯免疫吸附劑測定（ELISA）文章，其逐漸發展成為一種適用于液態樣本中微量物質測定的技術。
原理
免疫酶技術的基本原理是使用酶作為標記物，將其與抗體或抗原相結合。當酶標記的抗原或抗體與其對應的抗原或抗體發生作用后，可通過底物顏色的變化來進行抗原抗體的定性和定量分析。此外，該技術還可用于組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學技術。其中，酶聯免疫吸附實驗（ELISA）是最常見的免疫酶技術之一，它能夠簡化分離步驟，提高靈敏度，既可以檢測抗原，也可以檢測抗體。
試劑
實施免疫酶技術所需的試劑主要包括三種：固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"；酶標記的抗原或抗體，稱為"結合物"；以及酶反應的底物。這些試劑的選擇應根據具體實驗的目的和條件而定。
分類
雙抗體夾心法
雙抗體夾心法主要用于檢測抗原。首先將特異性抗體吸附在固相載體上，待被測溶液中含有相應抗原時，抗原就會與固相上的抗體結合形成配位化合物。經過洗滌后，加入酶標記的特異性抗體，該抗體也會通過抗原結合到載體表面。再次洗滌后，加入酶的底物，經過一段時間的酶催化，所產生的有色產物的數量與溶液中抗原的含量成正比，可以通過肉眼觀察或分光光度計進行測量。
雙位點一步法
雙位點一步法是在雙抗體夾心法的基礎上改進而來，它可以將標本的加入和酶標抗體的加入這兩步合并為一步。這種方法不僅簡化了操作過程，還縮短了反應時間。如果使用具有高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性都會得到顯著提升。
間接法測抗體
間接法主要用來檢測抗體。在這種方法中，抗原會被吸附在載體上，之后加入被測血清。如果有抗體存在，那么它們就會與抗原在載體上形成配位化合物。清洗后，加入酶標記的抗球蛋白（抗抗體）與之反應。再次清洗后，加入底物顯色，所得有色產物的數量與抗體的量成正比。
競爭法
競爭法可以用于測定抗原，也可以用于測定抗體。對于測定抗原而言，受檢抗原和酶標抗原會競爭性地與固相抗體結合，因此結合在固相上的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比關系。
捕獲法測IgM抗體
捕獲法通常用于測定血清中的特異性IgM抗體。由于血清中可能同時存在特異性IgM和特異性IgG，后者可能會干擾IgM抗體的測定，因此捕獲法會先將所有的血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，然后再去除IgG，以便更精確地測定特異性IgM。
應用
免疫酶技術廣泛應用于醫學診斷、食品安全等領域。在醫學領域，ELISA等免疫酶技術被用于檢測人體內的病原體、病毒、腫瘤標志物等多種生物指標。在食品安全方面，免疫酶技術則被用于檢測食品中的有害物質，如農藥殘留、獸藥殘留等。
參考資料 >